1.紙片擴(kuò)散法

　　(1）初篩試驗(yàn)∶選用頭孢泊肟、頭孢他啶、氦曲南、頭孢噻肟或頭孢曲松(每片含量均為30ug)藥敏紙片中的至少2種，用苗勒-欣頓(MHA)瓊脂，標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法測試抑菌環(huán)直徑，按美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCC LS)1997年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。凡頭孢泊肟或頭孢他啶的抑菌環(huán)直徑≤22mm，頭孢曲松s25mm，氨曲南或頭孢噻肟≤27mm，均應(yīng)高度懷疑為ESBLs菌株，應(yīng)進(jìn)一步作確認(rèn)試驗(yàn)來加以確診。

　　(2）表型確證試驗(yàn)∶用頭孢他啶(每片30ug)和頭孢他啶加克拉維酸(30ug和10ug);頭孢噻骯(每片30ug)和頭孢噻肟加克拉維酸(30ug和10ug);分別測量2種紙片單獨(dú)及加克拉維酸的抑菌環(huán)直徑。加克拉維酸和不加克拉維酸的抑菌環(huán)直徑≥5mm可確認(rèn)為ESBLs菌株。

　?、?微量肉湯稀釋法

　　(1）初篩試驗(yàn)︰原理同ESBLs紙片擴(kuò)散法步驟∶將大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌配成相應(yīng)濁度的菌懸液，加入含有以下濃度藥物的微量反應(yīng)板中，頭孢泊肟、頭孢他啶、氦曲南、頭孢噻腸、頭孢曲松。然后將接種了待測菌的反應(yīng)板置于35℃環(huán)境下，孵育16~18小時(shí)后觀察細(xì)菌在不同藥物中的生長現(xiàn)象。

　　(2）表型確證試驗(yàn)∶按照藥敏試驗(yàn)的微量肉湯稀釋法，將大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌配成相應(yīng)濁度的菌懸液，加入含有以下梯度濃度藥物的微量反應(yīng)板中，頭孢他啶的濃度范圍為0.25~128ug/ml，頭孢他啶/克拉維酸為0.25/4~128/4ug/ml，頭孢噻肟為0.25~64ug/d，頭孢噻污/克拉維酸為0.25/4~64/41ug/ml。置于35℃環(huán)境下，孵育16~18小時(shí)后觀察在不同濃度藥物中的生長現(xiàn)象。

　　以上就是內(nèi)酰胺酶檢測常用的兩種方法，希望能幫助大家更好地進(jìn)行檢測并保證其檢測的準(zhǔn)確性。